边境牧羊犬的人工受精

傲龙 · 发表于 2009-1-1 14:11:38

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1780年意大利生物学者斯帕兰兹尼（Abbe Spallanzani)用19g精液给母犬输精经过62天产出3只仔犬，这是用犬进行人工受精的开端，同时也正是由于这一成功的实验才揭开了家畜人工受精历史的序幕。1782年罗西(Rossi)重复这种实验也得到4只仔犬。但是在以后的近100年间虽然其它家畜的人工受精技术得到迅速的发展，而犬的人工受精却很少有人问津。考其原因，可能有以下两个方面：其一是公犬一次射出的精子数比其它家畜少，最多够配2至3只母犬；其二是各品种协会对人工受精繁殖出来的犬血统不予承认（除非事前取得协会繁殖委员会特准）。直到本世纪随着实验用的比格犬的大规模繁殖需要，才使犬的人工受精技术得到了实际应用。这是因为实验用犬如果不是大规模繁殖就很难找到只数的在月龄，体重，性别和来源上相同的犬，以便按均等原则组成实验与对照组。此外，实验用犬多是自繁自用，不需要品种协会的承认。
总结采用人工受精方法繁殖犬的情况不外以下四种：
（1）由于生理上或心理上的原因使公母犬不能直接交配。
（2）由于公母犬双方所在的地理距离过远而不能直接交配。
（3）希望从某一杰出的公犬获得较多的后代。
（4）防止性病的传染。
自从人工受精技术在奶牛繁殖中得到应用以来，哺乳动物精液的采集，品质评定，稀释，保存等都充分利用了牛人工受精所获得的科研成果，犬也不例外。以下仅根据用犬做实验的结果，将人工受精的实用技术摘要加以介绍。

一.犬的采精

早期的采精是从自然交配后母犬的阴道中抽出贮留的精液，最近则多用假阴道采精或者用按摩法采精。
假阴道法使用两层壁的筒状装置，在内胎与外壳之间充填与体温相等的温水，为公犬提供温热与压力，以模拟与自然交配类似的刺激，诱使公犬射出精液。内胎的一端与集精器连接，以便收集精液，假阴道在使用前要煮沸消毒；内胎用生理盐水冲洗。
按摩法也称手指采精，是用拇指和食指，中指在公犬龟头球的基部从腹背两面施加指压，促使阴茎勃起。如果勃起不充分，也可滑动按摩数次诱使射精。
此外，还有电采精法，即使用30V140mA的电流；正极置于直肠，负极置于第4--5腰椎处，间歇10秒通电刺激，大约反复刺激3次以后会引起阴茎勃起和射精。不过采取此法获得的精液中往往混有少量尿液，这是缺点。
精液是由三个部分组成的。第一部分最先射出的是少量的透明液体，主要由尿道球腺分泌物组成，数量大约为0.4--2.9ml；第二部分是乳白色较浓的液体，是由副睾射出的，其中含有较多的精子，数量为0.7--2.5ml；第三部分最后射出，大约能持续15分钟之久。其成分是前列腺分泌物，数量在10--20ml之间。由此可见，射精的第二部分最为有用。

二.采精频度

对公犬每日连续采精能使其精子数减少和活力降低，因此，一周之内采精不宜超过两次。
有人研究过间隔不同天数采精所得精子很有差别：间隔2天的精子数大约3亿；间隔3天约3.7亿；间隔4天约4.8亿；间隔6天约5.3亿；间隔10天以上约6亿，可见，采精间隔日数越多，所采得的精子数也越多。

                                                   三、  精液品质检查
（一）精液量
用5ml或10ml吸管测量容积。
（二）精子数
用血球计数器测定或用光电比色计测定。
（三）精子活力和生存指数
将精液加温至38℃，用200倍显微镜检查，按精子运动的情况分五种活力：“卅”（活泼的前进运动），“”（略呈活泼前进），“十”（缓慢的前进运动），“士”（旋回运动或摆动），“一”（静止）。
精子生存率是反映100个精子中上述各种活力的精子所占比率。计算生存指数时先把各种活力的精子按“卅”（100），“”（75），“十”（50），“士”（25）的指数分别统计，然后汇总计算。例如，活力为60“卅”，15“”，15“十”，5“士”的精液，其生存指数为：（60×100＋15×75＋15×50＋5×25）÷100=80
                                                四、犬精液的保存
（一）鲜精保存
采得的精液即便立即输精也难免在体外暴露一定时间，从而影响其中精子的生命。这种影响与外界温度有密切关系。据研究，把采得的犬精液装在试管中放置在4℃、15℃、37℃的温度下保存，然后观察其生存指数，结果：4℃6小时后降到60；8小时降到24；在15℃经1小时降到80，2小时后只剩20；在37℃经1小时降到60，2不时后几乎为零。据此判断，鲜精液采取后如果保存在冰箱里，数小时后仍可用于输精。
（二）稀释保存
往精液中加营养液及缓冲液可延长保存日数。常用的鲜稀释液如下。
1、灭菌牛奶有人用均质灭菌乳稀释的犬精液在4℃保存173小时后，其精子生存率仍在有效水平；将犬精用灭菌乳稀释5倍在4—8℃保存3天后给15只母犬输精，其中8只怀孕。但使用灭菌乳做稀释液的缺点是用显微镜检查精子活力时不易看清。此外，灭菌乳的pH值在5.8，略为偏低，有加缓冲液的必要。
2、柠檬酸钠卵黄液此液常用于牛、马、猪、羊的精液稀释。用于保存犬精液在5℃可保存16天，稀释倍数为30倍。
3、Tris稀释液 Tris ,即三羟甲基氨基甲烷（Tris Hydroxy Methyl Aminomethan）.稀释液配制：Tris2.4g,柠檬酸1.3g，果糖1g ,蒸馏水80ml,卵黄20ml配成。此稀释液在5℃保存24小时输精5只母犬有4只怀孕。
（三）泠冻保存
将精液冷冻以使之达到幸永久性保存是人工授精技术的一大突破。有人用20%的卵黄的Tris 液加11%的甘油稀释犬精液，按每分钟下必0.8—3℃的降温速度进行冷冻，得到场40%以上的精子生存率。另外有人用20%卵黄的柠檬酸钠液加10%甘油，经2小时甘油平衡时间后徐缓降温至-195℃保存也得到40%的生存率。长期保存时精子生存率随时间略有下降。如对6只公犬精液做冷冻保存观测其生存率的下降情况，结果是：4个月时平均生存率与初冻后一样；5个月时由49降为47，6个月时由39降为35；7个月时由50降为48。
                                                      五、输精方法
输精可用10ml注射器安上胶皮管，也可用直径10mm，长度200mm的尖头5ml吸管。
输精时常将母犬倒立，其后躯用人的两膝保定，另一人将输精管缓慢插入阴道往子宫外口注入精液。输精后为避免精液逆流，可按原姿势保持10分钟左右。注意在输精前要将母犬外阴洗耳恭听净拭干。
注入精子数的多少能影响受胎率和产仔数。大约输入3亿以上的精子才能得到较正常的受胎率，精子数在1亿时产仔数才能达正常水平。
输精时间应该在母犬进入发情期的24-48小时。
自然交配时，当把公母犬放在一处时根据母犬有无接受爬跨的反应即可判定是否进入发情期。在采用人工授精时可通过两种方法判定发情：一种是由犬主人用两手掐拢母犬腰角部（摸拟公犬的搂抱）；另一种方法是用牵引带牵一条任何品种的成年公犬，让它接近和舐闻母犬阴部，然后观察母犬阴部，然后观察母犬有无抬尾横弯的愿意按受交配的反应。

★Johnny℃江苏� · 发表于 2009-1-1 15:57:03

很是有道理，要学习一下了。

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